丙二醛(MDA)測試盒說明書 本試劑盒是在國內外眾多測試方法的基礎上改進的一種微量、快速、簡便、準確、對操作 人員健康無損害的測試方法。通過測試可反映出血清(漿)、乳汁等細胞外液、紅細胞、白細 胞、培養細胞以及各種動植物的細胞水平及亞細胞水平的脂質過氧化物的量。 一、測定意義: 機體通過酶系統與非酶系統產生氧自由基,后者能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸 (polyunsaturated fatty acid,PUFA),引發脂質過氧化作用,并因此形成脂質過氧化物。 如:醛基(丙二醛 MDA)、酮基、羥基、羰基、氫過氧基或內過氧基,以及新的氧自由基等。脂 質過氧化作用不僅把活性氧轉化成活性化學劑,即非自由基性的脂類分解產物,而且通過鏈式 或鏈式支鏈反應,放大活性氧的作用。因此,初始的一個活性氧能導致很多脂類分解產物的形 成,這些分解產物中,一些是無害的,另一些則能引起細胞代謝及功能障礙,甚至死亡。氧自 由基不但通過生物膜中多不飽和脂肪酸(PUFA)的過氧化引起細胞損傷,而且還能通過脂氫過 氧化物的分解產物引起細胞損傷。因而測試 MDA 的量常常可反映機體內脂質過氧化的程度,間 接地反映出細胞損傷的程度。 MDA 的測定常常與 SOD 的測定相互配合,SOD 活力的高低間接反應了機體清除氧自由基的 能力,而 MDA 的高低又間接反應了機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度,通過 SOD 與 MDA 的結果 分析有助于醫學、生物學、藥理及工農業生物試劑的發展。 二、測試原理: 過氧化脂質降解產物中的丙二醛 (MDA)可與硫代酸 縮合,形成紅色產物, 在 532nm 處有大吸收峰。因底物為硫代酸(Thibabituric Acid TBA)所以此法稱 TBA 法。 ∗ ) (TBA 三、 測試所需儀器設備: 可見光分光光度計,可調到 95℃左右的恒溫水浴箱或沸水鍋,離心機。 四、試劑盒組成與配制(100T/96 樣): 試劑一:液體 20ml×1 瓶,室溫保存。(天冷時會凝固,每次測試前適當水浴加溫以加速溶解, 直至透明方可應用)。 試劑二:液體 12ml×1 瓶,用時每瓶加 340ml 雙蒸水混勻,4℃冷藏(注意不要碰到皮膚上)。 試劑三:粉劑×1 支,用時將粉劑加入到 90℃~100℃的熱雙蒸水 60ml 中,(在溶解過程中可 適當加熱),充分溶解后用雙蒸水補足至 60ml 再加冰醋酸 60ml,混勻,配好的試劑 避光冷藏。(冰醋酸自備) 標準品:10nmol/ml 四乙氧基丙烷 5ml×1 瓶,4℃冷藏。 [注]:冰醋酸(分析純,乙酸濃度≥99.5%);測試盒冷藏至少可保存一年。 五、試劑盒組成與配制(50T/48 樣): 試劑一:液體 10ml×1 瓶,室溫保存。(天冷時會凝固,每次測試前適當水浴加溫以加速溶解, 直至透明方可應用)。 試劑二:液體 6ml×1 瓶,用時加 170ml 雙蒸水混勻,4℃冷藏。(注意不要碰到皮膚上)。 試劑三:粉劑×1 支,用時將粉劑加入到 90℃~100℃的熱雙蒸水 30ml 中,(在溶解過程中可 適當加熱),充分溶解后用雙蒸水補足至 30ml 再加冰醋酸 30ml,混勻,配好的 試劑避光冷藏。(冰醋酸自備) 標準品:10nmol/ml 四乙氧基丙烷 5ml×1 瓶,4℃冷藏。 |