人外周血淋巴細胞分離液使用原理及操作!
更新時間:2021-12-03 點擊次數:5640次人外周血淋巴細胞分離液使用原理及操作!
人外周血淋巴細胞主要是指體內的淋巴細胞,主要包括T細胞和B細胞。外周血淋巴細胞能夠幫助人體抵御外來的細菌和病毒,能夠起到良好的免疫作用。人外周血淋巴細胞分離液(FICOLL配制)是一種用于分離人外周血淋巴細胞的無菌、低內毒素水平的密度梯度分離液。
產品名稱:人外周血淋巴細胞分離液(FICOLL配制)
產品規格:200ml
儲存條件:室溫,避光
產品指標:
密度 1.077±0.001g/mL
滲透壓 290~350mOsm/kgH2O
無菌 0.1μm 濾膜過濾
原理:根據血細 胞的密度差異(紅細胞和粒細胞密度為1.090g/mL左右;淋巴細胞和單核細胞密度為1.075~1.090g/mL;血小板為 1.030~1.035g/mL),通過離心使一定密度的細胞按相應密度梯度分布,從而將淋巴細胞從人外周血或臍帶血中分離出來。
實驗步驟(僅供參考)
1. 取新鮮抗凝全血(EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可)或者去纖維蛋白血液,用等體積的全血及組織稀釋液 或者PBS稀釋全血。
2. 在離心管中加入適量分離液,將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方,注意保持兩液面界面清晰。
3. 室溫,水平轉子500~1000g,離心20~30min (血液的體積越大所需的離心力越大,離心 時間越長,佳的分離條件需摸索,離心轉 速大不超過1200g)。
4. 離心后將出現明顯的分層:上層是稀釋的 血漿層,中間是透明的分離液層,血漿與分 離液之間的白膜層即為淋巴細胞層,離心管 底部是紅細胞與粒細胞。
5. 小心的吸取白膜層細胞到15mL潔凈的離心 管中, 10mL PBS或細胞洗滌液洗滌白膜層 細胞。250g,離心10min。
6. 棄上清,5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞,250g,離心10min。
7. 重復上一步驟棄上清,細胞重懸備用
注:
本產品僅供科研實驗用,不做其它用途!