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全血線粒體提取試劑盒應(yīng)該如何正確使用

信帆生物供應(yīng)全血線粒體提取試劑盒，可以提取血液中線粒體，產(chǎn)品現(xiàn)貨供應(yīng)，歡迎大家隨時(shí)咨詢！除此之外我們也供應(yīng)組織線粒體提取試劑盒，細(xì)胞線粒體提取試劑盒，有需要的老師可以隨時(shí)咨詢！

一，試劑盒組份

組份                          XF9701-A (50T)    XF9701-A (100T)

紅細(xì)胞裂解液（10X）              100ml             100ml*2

白細(xì)胞裂解液                     50 mL              100 mL

線粒體清洗液                      25 mL             50 mL

線粒體保存液                     5 mL                 10 mL

二，保存條件

本試劑盒三個(gè)月內(nèi)使用可 4℃儲(chǔ)存，可置-20℃。

三，說明

本試劑盒可用于從血液中分離完整而純化的線粒體。

其制備物，可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。但不適用于進(jìn)一步 DNA 提取。

四，操作步驟

1. 血液處理：

血液要求：非肝素鈉抗凝血，使用新鮮血液。對(duì)于陳舊血液，由于凍凝過程中冰晶已經(jīng)對(duì)細(xì)胞核膜和

線粒體膜產(chǎn)生損傷，所以線粒體得率會(huì)大大減少，并且完整性也會(huì)降低。

a. 對(duì)于無核紅細(xì)胞全血（如哺乳動(dòng)物處周血），取血約 5ml（適當(dāng)分成幾管），加入 3 倍體積的紅細(xì)胞裂

解液（稀釋后的工作液,下同），混勻，800 × g

5 min 離心收集白細(xì)胞。加入 1-2ml 紅細(xì)胞裂解液（稀

釋后的工作液），吹打重懸白細(xì)胞，合并于一管中，800 × g 5~10 min 離心收集白細(xì)胞。此時(shí)如果白細(xì)

胞有可見紅色，可再次用少量(0.5ml)紅細(xì)胞裂解液洗細(xì)一次。

b. 對(duì)于有核紅細(xì)胞全血（如禽類全血），取約 200-300ul 全血，800 × g 5~10 min 離心收集全細(xì)胞，用

生理鹽水或者 PBS 清洗兩次，留沉淀去上清。清洗時(shí)請用去尖吸頭吹打。

2. 在收集到的細(xì)胞中，加入 1.0 mL 冰預(yù)冷的白細(xì)胞裂解液重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿

器內(nèi)，0℃冰浴研磨 20~40 次；

3. 勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管，4℃，1000× g 離心 5 min；

4. 取上清，加入一新的離心管中，4℃，1000× g 再次離心 5 min（一共兩次離心，完整去核）。

5．取上清，加入一新的離心管中，4℃， 12,000 × g 離心 10 min。離心后的上清含胞漿成分，可從中

提取胞漿蛋白。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管，線粒體沉淀在管底；

6. 在線粒體沉淀中加入 0.5 mL 線粒體清洗液重懸線粒體沉淀，4℃，1000× g 離心 5 min(再次去核）；

7．取上清，加入一新的離心管中，4℃， 12,000 × g 離心 10 min。棄上清，高純度的線粒體沉淀在管

底；

8. 用 50 -100μL 線粒體保存液或合適的反應(yīng)緩沖液重懸線粒體沉淀，立即使用或-70℃保存。

四 注意事項(xiàng)：

為保證獲得完整及盡可能多的線粒體，勻漿條件要示：一是全程低溫操作。第二是快速。第三，如有條

件可將勻漿后的碎片在顯微鏡下觀察。

全血線粒體提取試劑盒應(yīng)該如何正確使用