信帆生物銷售脂肪酶(LPS),歡迎搶購!
更新時間:2019-11-07 點擊次數:1019次信帆生物專業提供脂肪酶(LPS),產品質量穩定,*,確保銷售給客戶的產品是能夠符合質量標準,適合客戶要求的產品。本產品*,歡迎新老客戶前來咨詢訂購.
測定意義:
LPS又稱甘油酯水解酶,催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油(或者甘油二酯和單酯)。LPS廣泛的存在于各種生物中。血清中LPS的異常增高常見于胰腺炎和胰腺癌。
測定原理:
LPS催化油酯水解成脂肪酸,利用銅皂法測定脂肪酸生成速率,即可計算LPS活性。
自備儀器和用品:
研缽、臺式離心機、震蕩混勻器、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、可調式移液槍、甲苯、無水乙醇、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×2瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,室溫保存。
試劑三:液體×1瓶,4℃保存。
標準品×1瓶,10 µmol/mL的標準溶液,室溫保存。臨用前加入3.168 mL無水乙醇,充分溶解。
粗酶液提取:
稱取約0.1g樣品,加試劑一1 mL充分研磨,16000rpm 4℃離心40min,取上清液待測。
LPS測定操作:
- 分光光度計預熱30 min以上,調節波長到710 nm,蒸餾水調零。
2. 試劑一和試劑二置于37℃水浴預熱30min以上。
3. 空白管:取1.5 mL EP管,依次加入150μL試劑一和50μL試劑二,反復震蕩混勻;加入5μL蒸餾水,迅速震蕩混勻后置于37℃水浴準確反應10 min;加入400μL甲苯,反復震蕩混勻后,室溫4000rpm離心10min;取出離心管,小心吸取上層溶液200μL,加入另一1.5mL EP管,再加入50μL試劑三,反復震蕩混勻;室溫4000rpm離心10min,小心吸取上層溶液150μL,加入微量石英比色皿/96孔板,于710nm處測定吸光值。記為A空白管。
4. 標準管:取1.5 mL EP管,依次加入150μL試劑一和50μL試劑二,反復震蕩混勻;加入5μL標準品,迅速震蕩混勻后置于37℃水浴準確反應10min;加入400μL甲苯,反復震蕩混勻后,室溫4000rpm離心10min;取出離心管,小心吸取上層溶液200μL,加入另一1.5mL EP管,再加入50μL試劑三,反復震蕩混勻;室溫4000rpm離心10min,小心吸取上層溶液150μL,加入微量石英比色皿/96孔板,于710nm處測定吸光值。記為A標準管。
5. 測定管:取1.5mL EP管,依次加入150μL試劑一和50μL試劑二,反復震蕩混勻;加入5μL上清液,迅速震蕩混勻后置于37℃水浴準確反應10min;加入400μL甲苯,反復震蕩混勻后,室溫4000rpm離心10min;取出離心管,小心吸取上層溶液200μL,加入另一1.5mL EP管,再加入50 μL試劑三,反復震蕩混勻;室溫4000rpm離心10 min,小心吸取上層溶液150 μL,加入微量石英比色皿/96孔板,于710nm處測定吸光值。記為A測定管。
注意事項:
1、甲苯有毒,實驗過程中需佩戴手套和口罩。
2、實驗過程中須遠離火源。
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