雞白細胞介素2(IL-2)ELISA試劑盒產(chǎn)品簡介!
更新時間:2017-11-24 點擊次數(shù):1122次雞白細胞介素2(IL-2)ELISA試劑盒產(chǎn)品簡介!
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。自上世紀70年代初問世 以來,發(fā)展十分迅速,目前已被廣泛用 于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達到很高的敏感度。
檢測目的:
本試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白細胞介素2(IL-2)含量。
雞白細胞介素2(IL-2)ELISA試劑盒產(chǎn)品簡介!
實驗原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中雞白細胞介素2(IL-2)水平。用純化 的雞白細胞介素2(IL-2)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中 依次加入白細胞介素2(IL-2),再與 HRP 標(biāo)記的白細胞介素2(IL-2)抗 體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素2(IL-2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo) 準(zhǔn)曲線計算樣品中雞白細胞介素2(IL-2)濃度。
操作步驟:
- 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。
180ng/L | 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
90ng/L | 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150µl 的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
45ng/L | 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150µl 的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
22.5ng/L | 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150µl 的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
11.25ng/L | 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 | 150µl 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
- 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl, 然后再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡 量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
- 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
- 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
- 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復(fù) 5 次,拍干。
- 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,空白孔除外。
- 溫育:操作同 3。
- 洗滌:操作同 5。
- 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.
- 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
- 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
- 保存條件及有效期:
1.試劑盒保存:2-8℃
2.有效期:6 個月
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